FBS胎牛血清溶解(融化)三步法操作步驟詳解

剛進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的同學(xué)對于FBS胎牛血清解凍方法比較模糊，今天締一生物小編就為大家分享國際上推薦的三步法融化解凍，可盡可能減少沉淀出現(xiàn)，保留血清中因子的活性。

**步：室溫或較低溫水浴初步融化

溫度：室溫或15-20℃（新接的自來水溫度約24℃上下）

時(shí)間：

100ml血清：35分鐘（室溫）或5分鐘（15-20℃水浴）

500ml血清：90分鐘（室溫）或18分鐘（15-20℃水浴）

1000ml血清：100分鐘（室溫）或20分鐘（15-20℃水浴）

注意：此步驟的目的是使血清初步融化，降低冰塊大小，為后續(xù)步驟做準(zhǔn)備。

第二步：中溫水浴進(jìn)一步融化

溫度：20℃水浴（新接的自來水溫度約24℃上下）

時(shí)間：

100ml血清：15分鐘

500ml血清：25分鐘

注意：在融化過程中，輕輕搖動瓶身使血清混勻，但不要產(chǎn)生泡沫。

第三步：高溫水浴完全融化

溫度：37℃水浴

時(shí)間：

100ml血清：20分鐘

500ml血清：35分鐘

需要注意的是，如果血清是儲存在-80℃的，需要提前幾天先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中（至少24小時(shí)），再使用三步法溶解，以避免溫差過大使血清失活。

在整個融化過程中，血清的平面要完全浸在水中。

FBS胎牛血清溶解(融化)三步法可大限度保留血清中因子的活性，減少凍融次數(shù)，血清應(yīng)遵循現(xiàn)用現(xiàn)配，現(xiàn)配現(xiàn)解凍的原則。徹底解凍的血清，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，將其分裝，保證每一份夠一次使用量即可，比如：25ml/管、50ml/管等。分裝好的血清，密封好后，立即放回-20℃冰箱繼續(xù)冷凍儲存。需要配制培養(yǎng)基的時(shí)候，再從-20℃冰箱中取出一管來盡快解凍使用（**能全部配成培養(yǎng)基，不要有剩余），配好的培養(yǎng)基在4℃冰箱儲存**不超過一周。