一種耐熱大腸菌群分離方法

大腸菌群是指在37℃條件下24h內(nèi)能夠發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的無芽孢革蘭陰性桿菌，主要包括腸桿菌科的4個(gè)屬即埃希氏菌屬 (Escherichia)、枸櫞酸桿菌屬(Citrobacter)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)和腸桿菌屬(Enterobacter)的細(xì)菌。該類細(xì)菌主要來源于人和溫血?jiǎng)游锏募S便，故將大腸菌群作為食品被人和溫血?jiǎng)游锛S便污染的指示菌來評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量。

耐熱大腸菌群（thermotoletant coliform bacteria）是總大腸菌群的一部分，將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長(zhǎng)和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群（或糞大腸菌）。北美國(guó)家一般使用“糞大腸菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“糞大腸菌群”概念為等同采用AOAC方法，故而使用糞大腸菌群概念；而歐洲使用“耐熱大腸菌群”概念，較少使用“糞大腸菌群”。一般歐洲學(xué)者認(rèn)為，“糞大腸菌群”的提法不太科學(xué)，耐熱大腸菌群的范圍比糞大腸菌群范圍大。

我國(guó)生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每100 mL 水樣中不得檢出耐熱大腸菌群。用該菌的檢出情況來判斷水中是否受到人畜糞便的污染。耐熱大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的程度，也反應(yīng)了對(duì)人體健康危害程度的大小。糞便是人畜腸道排泄物，其中有健康的，也有腸道帶菌的，糞便內(nèi)除一般正常外，同時(shí)也會(huì)有一些腸道致病菌存在，所以水中有糞便污染，則可能推測(cè)水中著腸道致病菌污染的可能性，潛伏著與水有關(guān)的傳染病，對(duì)人體健康具有潛在的危險(xiǎn)性。目前檢測(cè)耐熱大腸菌群的方法有酶底物法、多孔微板法、紙片法、熒光原位雜交法、PCR法等。但多存在技術(shù)不完整，檢測(cè)成本高，操作繁瑣等缺點(diǎn)，目前，國(guó)標(biāo)GB/T5750-2006《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法》中耐熱大腸菌群的方法有多管發(fā)酵法和膜過濾法。

HiMedia公司（國(guó)際知名微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商）生產(chǎn)的貨號(hào)：M1571是一種用于檢測(cè)和計(jì)數(shù)水中耐高溫大腸菌群膜過濾法。經(jīng)過改良的培養(yǎng)基中含有顯色原、5-溴-6-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸，被大腸菌群由酶-葡糖醛酸酶裂解生成葡萄糖醛酸，只對(duì)大腸桿菌的菌落顯色形成紫色菌落。培養(yǎng)基中的蛋白棟和酵母提取物為菌種提供了必需的營(yíng)養(yǎng)素，乳糖是可發(fā)酵的碳水化合物，氯化鈉保持滲透平衡，磷酸二氫鉀和磷酸二鉀提供強(qiáng)有力的緩沖，在發(fā)酵作用下控制pH值，十二烷基硫酸鈉和脫氧膽酸鈉通過抑制革蘭陽(yáng)性細(xì)菌使培養(yǎng)基更有選擇性。通過膜過濾器，通過水樣本被涂到培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基在44.5±0.2 ℃，培養(yǎng)22-24h。大腸桿菌將在膜過濾培養(yǎng)基上形成紫色到洋紅色的菌落。

HiMedia公司的耐熱大腸菌群顯色培養(yǎng)基在國(guó)際上被廣泛應(yīng)用，如HeyangYuan等人研究電子受體對(duì)厭氧條件下抗生素抗性大腸桿菌、抗性基因和1類整合子基因敲除的影響文章中就有應(yīng)用（HeyangYuan, Jennifer H.Miller, Ibrahim M.Effects of electron acceptors on removal of antibiotic resistant Escherichia coli, resistance genes and class 1 integrons under anaerobic conditions.Science of The Total Environment[J], 2016(11)1 : 1587-1594.）；Jvo Siegrist也用它鑒別和檢測(cè)大腸桿菌和其他大腸菌群中也有應(yīng)用（Jvo Siegrist.Selective Growth Media for Differentiation and Detection of Escherichia Coli and Other Coliforms. Product Manager Microbiology[J]. 2011,11(8):1-5.）