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RT-PCR和real-time RT-PCR有何區(qū)別?

2024-01-04 16:29
文章附圖

PCR技術(shù)隨著時間的發(fā)展,分裂變化了很多種,今天分享的就是RT-PCR和real-time RT-PCR兩種的區(qū)別和應(yīng)用。


RT-PCR

RT-PCR被稱為逆轉(zhuǎn)錄 PCR(reverse transcription PCR)或反轉(zhuǎn)錄PCR,結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄和聚合酶鏈式反應(yīng)兩個步驟,用于在實驗室中復(fù)制和擴增特定的RNA序列。


逆轉(zhuǎn)錄

聚合酶鏈式反應(yīng)


RT-PCR原理:

逆轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription): RT-PCR的**步是將RNA轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的DNA。這個步驟涉及到逆轉(zhuǎn)錄酶(例如,逆轉(zhuǎn)錄酶或M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶),它能夠?qū)NA模板轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的互補DNA鏈。

PCR(Polymerase Chain Reaction): 在逆轉(zhuǎn)錄之后,產(chǎn)生的DNA(cDNA)成為PCR的模板。PCR利用DNA聚合酶(例如,Taq聚合酶)將目標(biāo)DNA序列反復(fù)復(fù)制,通過循環(huán)的加熱和降溫過程,每個循環(huán)產(chǎn)生兩倍的DNA。這樣,目標(biāo)序列得以大量擴增。

RT-PCR操作步驟

RT-PCR應(yīng)用:

主要用于研究基因表達、檢測RNA病原體、檢測RNA病毒等。逆轉(zhuǎn)錄的過程將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA,后續(xù)使用PCR進行擴增。


real-time RT-PCR

real-time RT-PCR的中文名稱是實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng),是一種結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄(RT)和實時聚合酶鏈式反應(yīng)(qPCR)的技術(shù),用于從RNA樣本中合成相應(yīng)的cDNA,并在逆轉(zhuǎn)錄的同時實時監(jiān)測和定量擴增特定的RNA序列。

圖片


應(yīng)用:

實時RT-PCR常用于研究基因表達的定量水平、檢測和定量RNA病毒、評估病原體感染等。它可以提供實時、定量的結(jié)果,并且能在PCR反應(yīng)過程中動態(tài)監(jiān)測目標(biāo)核酸的變化。

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