HiCrome顯色培養(yǎng)基與常規(guī)培養(yǎng)體系分離鑒定泌尿病原體的對(duì)比及評(píng)價(jià)

說明：本文根據(jù)以下文獻(xiàn)編譯

原文：Laila Akter,Rezwana Haque, and Md. Abdus Salam. Comparative evaluation of chromogenic agar medium and conventional culture system for isolation and presumptive identification of uropathogens. Pak J Med Sci. 2014，30(5): 1033–1038.

尿液是臨床實(shí)驗(yàn)室最常見的培養(yǎng)樣本。本實(shí)驗(yàn)比較了HiCrome-UTI顯色瓊脂（貨號(hào)：MV1353，品名：HiCrome UTI HiVeg Agar，HiMedia公司生產(chǎn)）與血瓊脂（BA）和麥康凱瓊脂（MAC）的性能，對(duì)尿液中的細(xì)菌進(jìn)行分離和初步鑒定。

尿路感染是重要的臨床疾病，全球范圍內(nèi)大量的門診病人和住院病人都與尿路感染有關(guān)，尿液則成為了最常用的培養(yǎng)樣本。

尿路感染的病因診斷，通常需要在標(biāo)準(zhǔn)瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行定量的培養(yǎng)，尿樣本中只有20%到30%的細(xì)菌會(huì)顯著生長(zhǎng)。主要的致病因子是大腸桿菌、克雷伯氏菌屬、單胞菌屬、變形桿菌屬、腸球菌屬和葡萄球菌屬等。

傳統(tǒng)培養(yǎng)基，如血瓊脂（BA）和MAC瓊脂常被一起使用，以增加實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

血瓊脂作為一種濃縮培養(yǎng)基，可以支持大多數(shù)泌尿病原體的生長(zhǎng)，但其在細(xì)菌鑒定方面的性能非常差。同樣，在Mac和Cled瓊脂上也可以區(qū)分乳糖發(fā)酵菌和非發(fā)酵菌，但進(jìn)一步的物種鑒定需要進(jìn)一步培養(yǎng)或不同的生化試驗(yàn)，延長(zhǎng)了鑒定時(shí)間，增加了成本。此外，它們促進(jìn)病原體生長(zhǎng)的能力有限，并不適合作為理想的初級(jí)分離方法。

摘要：

試驗(yàn)方法：對(duì)2012年1月至12月在孟加拉國拉賈希市伊斯蘭堡醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院采集的443例尿樣本進(jìn)行培養(yǎng)。將膿細(xì)胞≥5/hpf的尿液標(biāo)本同時(shí)接種到血瓊脂（BA）、MAC瓊脂和HiCrome瓊脂（CA）培養(yǎng)基上，并在37℃下進(jìn)行培養(yǎng)過夜，比較不同培養(yǎng)基的分離率和細(xì)菌種類的推測(cè)鑒定。

試驗(yàn)結(jié)果：共培養(yǎng)出189個(gè)（42.67%）陽性平板上的199株細(xì)菌，其中單微生物培養(yǎng)179株（40.40%），多微生物培養(yǎng)10株（2.26%）。HiCrome-UTI瓊脂和血瓊脂培養(yǎng)基生長(zhǎng)率均為100%，而MAC瓊脂培養(yǎng)基的生長(zhǎng)率為151（75.88%）。作為尿液培養(yǎng)基，HiCrome UTI瓊脂（97.49%）的推定鑒定率明顯高于MAC瓊脂（67.34%）（P<0.001）。在199個(gè)分離菌株中，大腸桿菌是從118個(gè)（59.30%）樣本中分離出的主要泌尿系病原體，其在CA、MAC和BA上的鑒定率分別為95.76%、93.22%和5.93%。所有10（100%）個(gè)多微生物在CA上旺盛生長(zhǎng)且肉眼可見，而在每個(gè)BA和MAC上只有1個(gè)（10%）。

試驗(yàn)結(jié)論：與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比，HiCrome UTI瓊脂用作尿培養(yǎng)基的分離率和鑒定率較高。它在促進(jìn)多微生物生長(zhǎng)，以及易于通過獨(dú)特的菌落顏色快速識(shí)別方面的特征是****的。

正文：

顯色瓊脂（CA）培養(yǎng)基越來越多地被用作一種多用途的原代培養(yǎng)工具，以更好地分離細(xì)菌種類并從臨床標(biāo)本中鑒別。7種生色底物被納入這些培養(yǎng)基中，這些底物被具有特殊功能的細(xì)菌酶分解而顯色。這種選擇性培養(yǎng)基不僅支持所有泌尿病原體的生長(zhǎng)，而且還可以更容易地診斷混合細(xì)菌感染。在一些研究中，將顯色培養(yǎng)基與傳統(tǒng)培養(yǎng)基進(jìn)行比較，其優(yōu)點(diǎn)包括減少鑒定時(shí)間、減少工作量、更容易識(shí)別混合生長(zhǎng)微生物，以及減少細(xì)菌鑒定的生化試驗(yàn)數(shù)量等。所有這些因素都可直接降低成本。

HiCrome UTI瓊脂是一種顯色培養(yǎng)基，有助于快速分離和鑒別大多數(shù)泌尿病原體，包括混合微生物的各種物種。大腸桿菌菌落是最常見的泌尿病原體，由于其含有β-半乳糖苷酶，裂解顯色底物而呈粉紅色，在該培養(yǎng)基上被明確的鑒定，無需進(jìn)一步的生化試驗(yàn)。產(chǎn)生β-葡萄糖苷酶的菌株，如腸球菌和沙雷雷克雷伯氏腸桿菌群，由于葡萄糖苷水解包含在培養(yǎng)基中的顯色底物而形成藍(lán)色菌落。同樣地，培養(yǎng)基中的色氨酸可用于檢測(cè)變形菌群。變形菌群生產(chǎn)色氨酸脫氨酶，裂解色氨酸后呈現(xiàn)彌漫的棕色。假單胞菌屬產(chǎn)生無色菌落，腐生菌產(chǎn)生白色菌落。某些后續(xù)的鑒定試驗(yàn)，如過氧化氫酶、氧化酶和吲哚試驗(yàn)，可直接從HiCrome-UTI瓊脂上的菌落中進(jìn)行，也可以不用傳代到另一種基本培養(yǎng)基上進(jìn)行抗生素敏感性試驗(yàn)。

方法：

樣本收集與培養(yǎng)基見前。

尿液培養(yǎng)：所有尿液樣本均無菌接種到HiCrome UTI瓊脂、血瓊脂和MacConkey瓊脂培養(yǎng)基上，使用28g的校準(zhǔn)金屬絲環(huán)，內(nèi)徑3.26 mm，含0.004 ml尿液。平板在37℃有氧培養(yǎng)，過夜培養(yǎng)后，通過菌落計(jì)數(shù)（100個(gè)菌落的生長(zhǎng)等于10⁵個(gè)菌落形成單位（cfu/ml尿），檢查有無明顯的細(xì)菌尿癥）。

細(xì)菌感染的顯著性標(biāo)準(zhǔn)：有癥狀的婦女體內(nèi)有大于10⁵ cfu/ml的非大腸菌群或大于10² cfu/ml的大腸菌群；有癥狀的病人體內(nèi)細(xì)菌含量大于10³ cfu/ml。

鑒定：根據(jù)制造商描述的菌落形態(tài)和顏色，在HiCrome UTI瓊脂上進(jìn)行細(xì)菌生長(zhǎng)的鑒定。Mac瓊脂和BA上的菌落也根據(jù)每個(gè)泌尿病原體的菌落特征進(jìn)行鑒定。使用標(biāo)準(zhǔn)鑒定方案（如革蘭氏染色、運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)、過氧化氫酶試驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)和其他適用于菌株的相關(guān)生化試驗(yàn)）對(duì)菌株進(jìn)行最終鑒定。

統(tǒng)計(jì)分析：所有數(shù)據(jù)均輸入社會(huì)科學(xué)統(tǒng)計(jì)包（SPSS）16.0版。對(duì)分類變量（如細(xì)菌類型、分離率、假設(shè)鑒定和培養(yǎng)中多微生物生長(zhǎng)率）生成了百分比頻率。采用卡方檢驗(yàn)（x2）計(jì)算P值，比較CA和MAC的假定識(shí)別率。

結(jié)果：

在443份尿液培養(yǎng)中，189份（42.67%）有明顯的細(xì)菌生長(zhǎng)，254份（57.33%）無生長(zhǎng)。培養(yǎng)陽性標(biāo)本中，單菌生長(zhǎng)179例（40.41%），兩種菌混合生長(zhǎng)10例（2.26%）。有118例樣本（59.30%）分離出大腸桿菌，其次是腐生葡萄球菌38例（19.09%）、腸球菌23例（11.56%）、克雷伯氏菌11例（5.53%）、假單胞菌4例（2.01%）、變形桿菌3例（1.51%）和腸桿菌屬2例（1.00%）。

Hicrome UTI瓊脂和血瓊脂培養(yǎng)基均支持100%細(xì)菌生長(zhǎng)，而Mac瓊脂培養(yǎng)基中有151例（75.88%）細(xì)菌生長(zhǎng)。

根據(jù)原代培養(yǎng)板上的菌落特征對(duì)199株細(xì)菌進(jìn)行推測(cè)性鑒定，Hicrome UTI瓊脂上可鑒定194株（97.49%），Mac瓊脂上可鑒定134株（67.34%），BA上可鑒定73株（36.68%）。Hicrome UTI瓊脂的推測(cè)鑒定率明顯高于作為主要尿培養(yǎng)基的Mac瓊脂。

所有10例（100%）混合菌群僅在Hicrome-Uti瓊脂培養(yǎng)基上被明確鑒定。而除大腸桿菌和變形桿菌屬的單一菌屬外，所有其他混合細(xì)菌均不能在Mac和血瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)及鑒定。

對(duì)尿液中的細(xì)菌分離及鑒定是一項(xiàng)耗時(shí)的工作，在使用傳統(tǒng)的培養(yǎng)基如血瓊脂、MAc瓊脂或Cled瓊脂時(shí)需要大量的時(shí)間。與之相反，Hicrome-UTI瓊脂培養(yǎng)基的分離率較高，對(duì)泌尿病原體的鑒定具有統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，因此比傳統(tǒng)培養(yǎng)基優(yōu)越得多。由于無需下一步的細(xì)菌鑒定試驗(yàn)，顯色培養(yǎng)基大大減少了實(shí)驗(yàn)室工作量，同時(shí)具有較高的培養(yǎng)鑒定效率。

血瓊脂是一種濃縮培養(yǎng)基，Hicrome UTI瓊脂也含有所有必需的營養(yǎng)素，以支持可能的泌尿病原體的生長(zhǎng)，這就是為什么所有的分離株都可以在這兩種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的原因。

就細(xì)菌的初步鑒定而言，與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比，HiCrome UTI瓊脂上鑒定的細(xì)菌種類比例明顯較高，可在顯色培養(yǎng)基上觀察每一種細(xì)菌獨(dú)特的菌落顏色，特別是針對(duì)大腸桿菌、克雷伯氏桿菌、腸球菌和腸桿菌屬。顯色培養(yǎng)基也能鑒定一些非發(fā)酵乳糖的大腸桿菌，而MAC瓊脂則不行。此外，Hicrome UTI瓊脂還具有限制變形桿菌、克雷伯氏菌和大腸桿菌粘液菌株等分離株擴(kuò)散生長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)，因此，當(dāng)存在混合菌群時(shí)，顯色培養(yǎng)基能夠更高效地檢測(cè)尿道病原體。

HiCrome UTI瓊脂有較高的分離率，可特異性識(shí)別混合菌群，從而使結(jié)果評(píng)估更準(zhǔn)確。由于BA和MAC瓊脂在菌落分離方面的局限性，其對(duì)混合菌群的鑒定率非常低。而HiCrome UTI瓊脂更有助于具體識(shí)別尿液樣本中的致病菌，從而減少使用不必要的抗生素。此外，與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比，HiCrome UTI瓊脂費(fèi)時(shí)更少。

本研究的總體結(jié)果表明，與傳統(tǒng)培養(yǎng)體系相比，Hicrome UTI瓊脂提供了一種更高效、省時(shí)的方法，能夠可靠地鑒定大多數(shù)泌尿系統(tǒng)病原體，并分離原代培養(yǎng)皿中的混合細(xì)菌。它簡(jiǎn)化了尿液微生物培養(yǎng)步驟，減少了技術(shù)人員的工作量，能夠顯著的提高鑒定效率以及降低成本。