最新2017年版ISO 22964克羅諾桿菌屬檢測標準解讀

阪崎克羅諾桿菌名稱經(jīng)歷了數(shù)次變化。最早因產(chǎn)生黃色素，被稱為黃色陰溝腸桿菌。后來發(fā)現(xiàn)該菌與陰溝腸桿菌有所不同，又更名為“阪崎腸桿菌”。 2008年，Iversen等人通過分子生物學技術（如多位點序列分型即MLST）鑒定，將該菌擴大為屬（克羅諾桿菌屬）。目前，克羅諾桿菌至少有7個種。其中阪崎克羅諾桿菌與人的關系最為密切。

克羅諾桿菌耐干燥環(huán)境，可在嬰幼兒奶粉、豆粉、營養(yǎng)粉、草本茶、淀粉中存活，在海水中也存在。有報道，在海產(chǎn)干制品中的檢出率可達17.83%。又有人在成都市某城區(qū)超市、農(nóng)貿(mào)市場、食品小吃店中調(diào)查，發(fā)現(xiàn)100份食品樣品中有32份樣品分離出克羅諾桿菌，分離率為32%。

克羅諾桿菌耐高溫，耐紫外線，能產(chǎn)生生物膜對消毒產(chǎn)生抵抗。同時，阪崎克羅諾桿菌對嬰幼兒的感染致死率高，因此，在嬰幼兒食品和乳品中進行檢測非常重要，我國食品安全國家標準在這方面也有規(guī)定。

ISO/TS 22964：2017是國際上最新發(fā)布的一版克羅諾桿菌屬檢測標準，它取代了2006年版。主要變動是：將檢測范圍從阪崎克羅諾桿菌擴大至整個克羅諾桿菌屬，樣本包括人類食品、動物飼料和食品生產(chǎn)區(qū)的環(huán)境樣本；mLST肉湯被克羅諾桿菌選擇性肉湯（CSB）所取代；阪崎腸桿菌分離瓊脂被克羅諾桿菌分離顯色瓊脂（CCI）所取代；生化驗證試驗有修正。

ISO/TS 22964：2017制訂的克羅諾桿菌屬檢測過程大致為：1. 預增菌。取樣，在緩沖蛋白胨水(BPW)中34℃-38℃培養(yǎng)18h±2h；2. 增菌。轉移0.1ml預增菌液至10ml CSB，混勻。41.5℃培養(yǎng)24h±2h。3.接種。用接種環(huán)接種10ul菌液至克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基（CCI）平板上，41.5℃培養(yǎng)24h±2h。4.挑出典型菌落，在TSA上純培養(yǎng)并進行生化驗證。

CCI平板上典型的克羅諾菌落為小至中等大小（1mm~3mm）藍色或藍綠色菌落。非克羅諾菌落則為白色，或白色同時中心為綠色或灰色、黑色。有些非克羅諾菌為黃色或紅色。

常見的生化驗證包括氧化酶、賴氨酸脫羧、鳥氨酸脫羧、四種糖發(fā)酵產(chǎn)酸（阿拉伯糖、山梨醇、蔗糖）、4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷的水解。其他如伏普、甲基紅試驗等為可選。克羅諾桿菌屬為氧化酶反應陰性，葡吡喃糖苷的水解和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸陽性，而賴氨酸脫羧和山梨醇產(chǎn)酸均為陰性。

關于克羅諾桿菌選擇性肉湯（CSB），微生物產(chǎn)品供應商HiMedia公司提供有商品化脫水培養(yǎng)基Cronobacter Screening Broth（貨號M1786），1升中加入1管萬古霉素（貨號FD233）制備為完全培養(yǎng)基。HiMedia公司也提供有克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基（CCI），其組成和ISO/TS 22964：2017完全一致，貨號為M2062I。同時，HiMedia公司也提供有4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷，貨號為RM10294-1G，歡迎選購。

圖. 克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基（CCI, 貨號為M2062I）

在ISO/TS 22964：2017的附錄3中，還列表列舉了阪崎克羅諾桿菌與其他相似菌的鑒別特征。表中的數(shù)字代表者陽性菌株的比例。其中阪崎克羅諾桿菌與陰溝腸桿菌的區(qū)別在于：4-硝基苯--D-葡吡喃糖苷水解試驗，阪崎克羅諾桿菌（+），陰溝腸桿菌（基本-）；山梨醇發(fā)酵，阪崎克羅諾桿菌（-），而陰溝腸桿菌(+)，可供檢測人員參考。