單增李斯特菌的檢測(cè)方法

傳統(tǒng)檢測(cè)方法

食品中單增李斯特菌的傳統(tǒng)檢測(cè)方法包括增菌、分離和鑒定 3 個(gè)環(huán)節(jié)。目前，分離環(huán)節(jié)常會(huì)采用顯色培養(yǎng)基，使其菌落顏色不同于其它干擾菌，實(shí)現(xiàn)快速分離。這里推薦HiMedia公司（國(guó)際知名微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商）生產(chǎn)的李斯特菌顯色培養(yǎng)基（HiCrome標(biāo)識(shí)，貨號(hào)MV1540）。由于單核細(xì)胞增生李斯特氏菌和英諾克李斯特氏菌具有相似的生化特性，傳統(tǒng)培養(yǎng)基（PALCAM培養(yǎng)基）不能區(qū)分，使用HiMedia李斯特菌顯色培養(yǎng)基（MV1540）可有效區(qū)分單增李斯特氏菌和英諾克李斯特氏菌，且它在制備時(shí)用無(wú)瘋牛病風(fēng)險(xiǎn)的植物蛋白胨取代了動(dòng)物蛋白胨，安全可靠。

鑒定常采用生化反應(yīng)和血清學(xué)反應(yīng)。目前，生化反應(yīng)的鑒定技術(shù)多采用數(shù)值分類鑒定和自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)。該技術(shù)主要包括：（1）HiMedia公司的HiBio-IDTM李斯特菌生化鑒定卡（貨號(hào)：KB012A）或HiBio-IDTM動(dòng)力學(xué)李斯特菌生化鑒定卡（貨號(hào)：KBM003A）、API Listeria 生化鑒定試紙條。（2）全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)，HiMedia公司HiBio-IDTMReader全自動(dòng)李斯特菌生化鑒定儀、VITEK 系統(tǒng)、MIDI 系統(tǒng)及 BIOLOG 系統(tǒng)等。

單增李斯特菌的檢測(cè)除傳統(tǒng)檢測(cè)方法外還有多種快速檢測(cè)方法，主要應(yīng)用于增菌以后，生化鑒定之前，對(duì)陰性樣本進(jìn)行快速篩選，以縮小檢測(cè)范圍，減少檢測(cè)任務(wù)，提高檢測(cè)效率及準(zhǔn)確率。快速檢測(cè)方法主要包括免疫學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)兩大類。

免疫學(xué)檢測(cè)法

該技術(shù)以抗原抗體免疫為基礎(chǔ)，制備特異性克隆抗體檢測(cè)細(xì)菌。目前國(guó)內(nèi)外李斯特菌快速檢測(cè)的此類技術(shù)主要包括：酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)、金標(biāo)免疫層析技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)等。ELFA靈敏度比ELISA高，并省去了ELISA中的顏色反應(yīng)，縮短反應(yīng)時(shí)間；但缺點(diǎn)是成本較高，目前主要應(yīng)用在自動(dòng)酶聯(lián)熒光免疫檢測(cè)系統(tǒng)(VIDAS)上。

金標(biāo)免疫層析技術(shù)是將高度特異性抗單增李斯特菌抗原的抗體束縛在色原載體上，且可與固相支撐基質(zhì)相分離。當(dāng)檢測(cè)樣品中存在李斯特菌時(shí)，測(cè)試單元的試劑將會(huì)被展開(kāi)，產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的確定性反應(yīng)。流式細(xì)胞術(shù)是一種在功能水平上對(duì)單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測(cè)手段，它可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)。

分子生物學(xué)檢測(cè)方法

分子生物學(xué)檢測(cè)方法主要包括核酸探針雜交技術(shù)、PCR檢測(cè)技術(shù)等。DNA探針?lè)ㄊ菍蓷l堿基互補(bǔ)的DNA鏈在適當(dāng)?shù)臈l件下雜交，通過(guò)檢測(cè)樣品與標(biāo)記性DNA探針之間形成的雜交分子來(lái)檢測(cè)樣品中的單增李斯特菌，測(cè)定放射性或熒光強(qiáng)度即可得出樣品中單增李斯特菌的個(gè)數(shù)。PCR是近年來(lái)廣泛應(yīng)用的分子生物學(xué)檢測(cè)方法，在單增李斯特菌的檢測(cè)中以其遺傳物質(zhì)高度保守的核酸序列（常用的靶序列包括hly、actA、prfA等）設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增。

該方法特異性好，但靈敏度低，對(duì)樣品進(jìn)行前處理后再進(jìn)行擴(kuò)增，可以提高檢出率和檢測(cè)靈敏度。PCR技術(shù)還可對(duì)單增李斯特菌進(jìn)行定量檢測(cè)。國(guó)內(nèi)外目前主要應(yīng)用的PCR技術(shù)包括：實(shí)時(shí)熒光PCR(Real-time PCR)、多重PCR、恒溫?cái)U(kuò)增、RT-PCR方法、IMS-PCR檢測(cè)技術(shù)等。