活性因子的生物測(cè)定法

在分析化學(xué)中，常常采用色譜、質(zhì)譜、磁共振和一般生化以及免疫學(xué)方法對(duì)樣本成分進(jìn)行測(cè)定。但還存在一類特殊的測(cè)定方法，即生物測(cè)定法。生物測(cè)定法的產(chǎn)生由來(lái)已久，常常用于有生物活性和生理功能的因子的測(cè)定。它常常采用一種哺乳動(dòng)物細(xì)胞或者一種細(xì)菌，作為可用于觀察或測(cè)量的響應(yīng)器或效應(yīng)器(effector)，來(lái)對(duì)活性因子進(jìn)行檢測(cè)，這也有些近似藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。例如白細(xì)胞介素2，它是一種T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，它是用小鼠的T淋巴細(xì)胞系CTLL-2細(xì)胞的增殖來(lái)檢測(cè)，ED50等于0.1ng/ml，可見(jiàn)該法的靈敏度相當(dāng)高。

因此，生物測(cè)定在方法學(xué)上是一種很有特點(diǎn)、很有用的方法。它也不限于測(cè)定某個(gè)因子，而也可以測(cè)定生物制品，如用二倍體細(xì)胞的促生長(zhǎng)狀況來(lái)質(zhì)控胎牛血清。在食品領(lǐng)域中，也有生物測(cè)定法，只不過(guò)是其中的一個(gè)分支，是微生物培養(yǎng)法，或微生物法，來(lái)檢測(cè)維生素，如微生物B12、葉酸、泛酸、煙酸、生物素等。

維生素也是一類活性因子，具有重要的生理作用。例如，缺少葉酸會(huì)導(dǎo)致胎兒神經(jīng)管發(fā)育障礙。而我國(guó)的嬰幼兒配方乳品中，存在有的品牌葉酸等維生素不足的情況，因而達(dá)不到補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)的效果。因此，測(cè)定食品中的維生素含量十分重要，尤其是奶制品。

微生物法測(cè)定維生素，原理和上面所說(shuō)差不多。通過(guò)添加維生素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的維生素，使原先不含有這種維生素的培養(yǎng)基具有了這種營(yíng)養(yǎng)，從而使鼠李糖乳桿菌、萊士曼乳桿菌、植物乳桿菌等測(cè)定菌能夠不斷增殖，直到這種維生素營(yíng)養(yǎng)耗盡。而檢測(cè)OD值可以確定試管中的菌量。需要注意的是，為了保證線性增長(zhǎng)，需要在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)進(jìn)行標(biāo)曲和測(cè)定，必要的話對(duì)樣本進(jìn)行稀釋。又葉酸測(cè)定菌鼠李糖乳桿菌據(jù)報(bào)道，在增殖過(guò)程中容易產(chǎn)生大量絮狀沉淀，尤其在高濃度標(biāo)準(zhǔn)管中更為明顯。因此建議將絮狀物質(zhì)進(jìn)行充分震蕩，并快速進(jìn)行光密度的測(cè)定。同時(shí)注意所用初始培養(yǎng)基應(yīng)盡量不含痕量待測(cè)的維生素，否則會(huì)造成標(biāo)曲偏移和本底過(guò)高。目前該產(chǎn)品只有進(jìn)口的質(zhì)量較為可靠，如微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商HiMedia公司生產(chǎn)的葉酸干酪培養(yǎng)基和維生素B12測(cè)定用培養(yǎng)基。

總之，微生物法在生物測(cè)定法中靈敏度極高，而且操作步驟簡(jiǎn)單，不需要特別的技巧和設(shè)備，也不需要一系列的提純步驟。即使有些類別樣品需要提取，但步驟仍然簡(jiǎn)單，因此微生物法在生物測(cè)定法中仍然占有重要的一席之地。